发布时间：2021-06-08 热度：

　　基因毒性杂质（genotoxic impurity）也被称为DNA诱变性杂质（DNA mutagenic impurity），是指药品中存在的杂质，在微量水平下，可能直接或间接造成DNA损伤，导致基因突变、染色体断裂或重排，有引发癌症的潜在风险。因此，基因毒性杂质的控制和分析与药品的安全性密切相关。

　　ICH发布了基因毒性杂质的控制指导原则ICH M7：“评估和控制药物中的DNA活性（致突变）杂质以限制潜在的致癌风险”，FDA、EMA等监管机构也发布了相应的基因毒性杂质控制指导原则。ICH M7指导原则对基因毒性杂质的定义、风险评估、分类、限度制定、控制策略等进行了详细地说明。但是，目前的指导原则缺少对基因毒性杂质分析方法的介绍和说明。

　　基因毒性杂质一般为痕量杂质，限度要求在ppm级别或ppm以下。基因毒性杂质化学结构多样，一般含有化学性质活泼的基团，部分基因毒性杂质稳定性差。原料药或制剂中的主成分或其他杂质可能对基因毒性杂质的检测造成干扰。因此，基因毒性杂质的分析有别于一般杂质，灵敏度和专属性要求高，是杂质分析和质量控制的难点。

　　基因毒性杂质一般为痕量杂质，限度要求在ppm级别或ppm以下。基因毒性杂质化学结构多样，一般含有化学性质活泼的基团，部分基因毒性杂质稳定性差。原料药或制剂中的主成分或其他杂质可能对基因毒性杂质的检测造成干扰。因此，基因毒性杂质的分析有别于一般杂质，灵敏度和专属性要求高，是杂质分析和质量控制的难点。

　　基因毒性杂质分析方法开发的一般原则

　　基因毒性杂质分析方法应以基因毒性杂质的物理化学性质、杂质的限度要求、仪器设备条件为出发点进行开发和选择。建立痕量杂质分析方法的关键是对样品中待分析物的物理化学性质有全面的了解。基因毒性杂质的挥发性（沸点）、极性、化学稳定性决定了分离分析的手段以及样品的前处理方法，杂质的特征性化学基团决定了可选择的检测器类型，杂质的限度要求决定了分析方法应具备的灵敏度，主成分和其他杂质的性质和结构决定了待测基因毒性杂质的检测是否会受到干扰。因此，在基因毒性杂质分析方法的开发前期，应深入理解基因毒性杂质和样品的性质，建立相应的“知识库”，使方法开发精准、高效，提高方法开发的成功率。

　　基因毒性杂质分析方法的选择

　　分析方法主要包括样品前处理方法、分离分析手段、检测技术三个方面。分析方法的灵敏度、准确度、专属性等是由上述三个方面共同决定的，因此，分析方法开发应综合考虑三个方面的因素。

　　分离分析方法的选择

　　气相色谱法

　　气相色谱法（Gas Chromatography，GC）是挥发性基因毒性杂质的常用方法。气相色谱法的进样方式主要有直接进样、静态顶空进样两种。直接进样适用于易气化、化学稳定性较好的样品，灵敏度较高，但是非挥发性的成分易在进样口和色谱柱柱头沉积，干扰检测。静态顶空进样法是将样品溶解后密闭于容器内，加热后待测组分达到气-液平衡，取气体进样分析，因此可减少非挥发性成分的干扰，但是静态顶空进样不适用于沸点较高或化学稳定性较差的基因毒性杂质分析。

　　液相色谱法

　　液相色谱法（Liquid Chromatography，LC）适用于非挥发性的杂质分析，其中反相色谱法是目前应用最广泛的分离方法，色谱柱固定相填料类型多样，可满足不同极性的杂质分离分析的要求。十八烷基键合硅胶色谱柱最为常用，其他色谱柱包括辛烷基键合硅胶色谱柱、苯基柱、氨基柱、氰基柱等，亲水作用色谱（Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography，HILIC）作为反相色谱的互补方法，可增强极性杂质在色谱柱上的保留，具有独特的优势。液相色谱方法应尽可能使待测的基因毒性杂质与其他组分达到良好的分离，即使采用了高专属性的检测器。

　　离子色谱法

　　离子色谱法（Ion Chromatography，IC）的主要分离机制为离子交换，适用于强极性或离子型的基因毒性杂质检测，这类杂质在常规的液相色谱柱上不保留。离子色谱法一般采用阳离子交换色谱柱或阴离子交换色谱柱。